Descrição

Este diagrama interativo mostra, passo a passo, como os blocos são realizados em parafina, para posteriormente fazer cortes com o micrótomo.

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

A histologia é uma disciplina com mais de 100 anos de idade, neste momento que os histologos desenvolveram muitas ferramentas, técnicas e processos a fim de Visualizar as células e tecidos. Descrever todas essas ferramentas, técnicas e processos seria motivo para uma completa coleção de livros.
O objetivo deste manual é introduzir o aluno ao conhecimento das técnicas e instrumentos comuns em um laboratório de histologia, com o objectivo de que o aluno compreenda como as amostras, que em seguida, ele examina ao microscópio e assim melhorar o seu processo de aprendizagem tem sido.
Por isso o script principal neste tópico vamos focar as técnicas e os instrumentos mais comumente usados e no final explicar outros tipos de instrumentos, técnicas e protocolos, embora elas sejam usadas em histologia torná-lo esporadicamente para alguns e estudos específicos.

O MICROSCÓPIO
A histologia é focada no estudo dos tecidos e células. Dado o pequeno tamanho destas estruturas, a histologista requer sistemas de aumentam a imagem, o que conhecemos como microscópios, desdeEssas estruturas são tão pequenas que não pode ser claramente discernível a olho nu.
Atualmente, existem vários tipos de microscópios, embora o curso de campo óptico do microscópio é o instrumento básico de estudo e como tal o aluno deve conhecê-lo suficientemente.

Para começar com, há uma série de fatos que o aluno deve saber:
O olho humano é incapaz de distinguir as coisas pequenas, mas como qualquer outro sistema óptico tem um limite; ou seja, chega uma hora que não é capaz de distinguir dois pontos como separadas, mas como um único item. Essa separação mínima que permite reconhecer como separar dois pontos é conhecida como "Limite de resolução". Isso fez o ser humano tem buscado sistemas para ampliar a imagem.
(B) o desenvolvimento das primeiras lentes no século XVII levou ao surgimento dos primeiros microscópios rudimentares. Desde então, os microscópios evoluíram para o atual. Apesar deste desenvolvimento, microscópios ópticos têm um limite de resolução limitando os aumentos e que é determinada pela natureza da luz.
C hoje em dia os melhores microscópios não excedaos aumentos de 1000-1500 e há um limite de resolução de 0,2 m (0,0002 mm).
(D) são chamados microscópios simples para quem tem um, ou um único conjunto de lentes. É coloquialmente referida como lupa.
E são chamados microscópios compostos, para aqueles que têm duas lentes ou conjuntos de lente, alguns são conhecidos como lentes objetivas e outros óculos. Os microscópios de laboratório atual são microscópios compostos.
F em um microscópio composto, é essencial que a amostra a ser observada é muito fina para que a luz pode passar através dele e atingir a lente objetiva.
G luz passa através dos diferentes tecidos de um corte de forma semelhante, por isso é quase impossível distinguir os diferentes componentes do Tribunal de Justiça. Eis por que é necessário tingir os cortes, a fim de distinguir os seus componentes.

Além disso, há uma série de conceitos e definições relacionadas com a microscopia que o estudante também deve saber para compreender o microscópio e gerenciá-lo de forma mais eficiente.

CONCEITOS E DEFINIÇÕES:
-Ampliação: É o número de vezes que um sistema de microscópio pode aumentar o tamanho da imagem de um objeto.
-O poder de resoluçãoa: é a capacidade de um sistema óptico para exibir dois pontos muito próximos uns dos outros como elementos separados.
-Limite resolução: é a menor distância que um microscópio pode exibir dois pontos vem como elementos separados e não como um único ponto. Este parâmetro depende do comprimento de onda da luz (energia) e a abertura numérica da lente utilizada. Em termos práticos em um microscópio óptico convencional com um x 100 objetivo (e olho e x 15, ou seja, a lente intermediária de aumentos de cerca de 1500) são 0.2 m. Ele é calculado usando a fórmula: LR = /2AN (donde representa o comprimento de onda e uma abertura numérica).
-Abertura numérica: é a capacidade da lente para permitir que a luz passe através de (mide cone de luz que pode oferecer suporte a um objetivo). É único para cada objectivo.
-Profundidade de campo: a distância entre as peças mais de um objeto (de acordo com o eixo óptico do microscópio), que pode ser visto sem alterar o foco. Essa distância é maior nos objectivos do aumento pequeno e inferior no maior aumento.


O microscópio óptico é um instrumentoDepartamento de precisão, formado por uma infinidade de peças e partes, que é conveniente para o aluno sabe que o mais importante. 1 Técnicas histológicas: como é e como o microscópio óptico

-Olhos: É a lente de montagem que forma a imagem final estendida que estamos presenciando.
-Revólver revolver: microscópios atuais frequentemente realizadas várias metas que são dispostas em uma roda chamada revólver. Para colocar o objectivo pretendido deve mover o revólver para a posição apropriada. Podemos encontrar microscópios equipados com 3, 4 ou revólver de 5 posições.
-Objectivo: É o dispositivo que contém o conjunto de lentes que captam a luz da amostra e gerar o primeiro alargamento, existem diversas ampliações.
-Preparar amostra: é a superfície onde a amostra é colocada para observar.
-Sistema Koeller: permitem para focar o feixe sobre o eixo óptico do microscópio. (Nem todos os microscópios têm estes sistemas).
-Condensador: Permite para focar o feixe de luz em uma área pequena da amostra. (Não visível no esquema).
-Abertura: Permite ajustar o contraste da imagem.
-Controle de intensidade da luz: muitos microscópios atuais possuem este dispositivo de controle de intensidade de luz.
-Rodas dedeslocamento: são comandos que permitem que você mover a amostra para o comprimento e a largura da amostra deck (eixos x e e).
-Controlo de aproximação micrométrico: permite que você experimente o foco fino usando luz deslocamento (no eixo Z) da fase.
-Controle de foco aproximado: permite a aproximação ao plano focal através de grandes deslocamentos do pavimento ao longo da amostra de eixos (vertical) de Z.
-Tripé: É o metal de habitação, que serve como apoio para o resto do sistema. O tripé anexa à base formando um bloco sólido e estável.

Diferentes conjuntos de lentes e outros elementos de óptica definem o caminho do microscópio de luz.
1. A luz necessária para a operação do microscópio é gerada por uma lâmpada.
2. O diâmetro do feixe é restrito com o uso de uma abertura (uma placa de metal com um furo).
3. A lente condensadora condensar o feixe sobre a amostra.
4. O objectivo é um primeiro alargamento da imagem. A extensão depende do objetivo escolhido.
5. Um prisma altera a direção da luz para fazer uma observação confortável em um ângulo direito.
6. O olho é o segundo e último ampo liation de imagem.

Como você pode ver no diagrama presente em um microscópio óptico, elementos são muitas e variadas e podemos dividi-los em duas categorias: aqueles destinados a gerar, modular, concentre-se e condensar a luz (como diafragmas, condensadores, aberturas, etc...) e outros destinados a ampliar a imagem (objectivos e oculares).
Sem dúvida, as mais importantes são ocular e objetiva.
-Objectivos: O microscópio muitas vezes têm muitos objetivos e diferentes posições você arma, os mais comuns são os revólveres de 4 posições. A variedade de objetivos no mercado é grande, embora os 4 objectivos mais comuns em microscópios de laboratório são geralmente 4 x, 10 x, 40x e 100x, sendo o último mergulho.
-Olho: Todos os microscópio de laboratório convencional se 1 (monocular) ou duas oculares são os mesmos (se binocular). As oculares mais comuns com 10 x (x 10) Embora alguns fabricantes oferecem, para trabalhos especiais, outro ocular (15 x, ou x 5), por exemplo.

Tendo em conta que o total aumenta de um microscópio é o resultado da multiplicação do objetivo parcial e aumentos de ocular podem-se deduzir queo intervalo de aumento de um microscópio óptico convencional é 40 x a 1.000 x.
Microscópios binoculares, uma ou duas oculares podem ser formado, permitindo uma boa visão binocular, mesmo se usado óculos, cuja correção óptica pode compensar se formar as oculares. Em um Microscópio monocular, não é necessário nem isso.
NA MAIORIA DOS CASOS NÃO PRECISA USAR ÓCULOS COM O MCIROSCOPIO.

O aluno deve aprender a operar corretamente o microscópio. 2 Técnicas histológicas: operações do microscópio óptico
O primeiro passo é verificar se o microscópio está conectado corretamente e a luz trabalha com a intensidade adequada.
Em primeiro lugar, recordar o aluno usar óculos que devem ajustar as oculares.
Embora pareça óbvio lá colocar a preparação corretamente, ou seja, com a lamínula para cima.
O estudo de qualquer preparação deve começar com o objetivo de menor (no objectivo de muitos microscópios 4 X). Mais comum é estudar toda a superfície da amostra para localizar as diferentes estruturas.
Uma vez localizada a estrutura que você deseja considerar a mudança para o próximo objectivo (10 x) e executar a mesma operação, até mesmo, se necessário, o mais objetivo (100 x).
Sem dúvida o estudiante vai aprender o conceito de "A difração da luz", que pode ser resumido dizendo que a luz um pouco muda de direção quando ele passa de um meio para outro (por exemplo de vidro para o ar). A mudança de direção ocorre em um ângulo que depende de cada um dos meios, e que pode ser expressa por um valor único para cada mídia que é conhecido como "índice de refração".
Usando pouca energia este objectivo de fenômeno mal afeta a observação, mas ele se torna um problema quando usamos um objectivo de 100x, principalmente porque estes aumentos a preparação deve ser muito perto do gol e a mudança de direção da luz do ar vidro (slide) e novamente para as causas de vidro (lente) que não podem se concentrar corretamente a amostra. para evitar este lugar, entre a lente objetiva e a parte superior da amostra uma pequena gota de um óleo especial (óleo de imersão), que tem um similar para o índice de refração do vidro, assim a luz não mudar de direção nesta interface, e como resultado você pode concentrar-se sem problemas.
Se após estudar a amostra para 100 x é necessário para retornar aoestudo com o objetivo de 40 x é necessário lembrar que a amostra tem mesmo uma gota de óleo de imersão que poderia solo essa meta, por isso vai ser limpo com um lenço ou papel macio, embebido em solução de limpeza.
Uma vez terminado o comentário de retirar os alimentos limpos, como você tem apenas descrito, bem como o objectivo de 100 x.
No final da observação período deve ser a que os objectivos do microscópio (deck), bem como os preparativos estão completamente limpos.
Vamos também verificar que o microscópio é desligado corretamente e certifique-se de você deixar a lente menor, colocada para facilitar o seguinte uso do microscópio.

PREPARAÇÃO DE AMOSTRAS
Agora que sabemos que o microscópio óptico Obtém uma imagem ampliada para passar a luz através de uma amostra e um conjunto de lentes, é claro, que nós não pode estudar um órgão ou uma parte de um corpo sob o microscópio, já que a luz não poderia cruzar. É necessário obter amostras finas a luz passar e estudar no microscópio.
Como fazer para amostras finas?
A resposta é óbvia, deve ser marcadoAR corta muito bem para o corpo de estudo, o que não é fácil, essa não pode verificar o estudante se você tentar cortar um pedaço de carne fresca com uma faca bem afiada, você vai descobrir que você não pode obter fatias finas. Isto é devido a nova carne não tem consistência nem a dureza necessária para cortes suficientemente finos, enquanto se podemos congelar a carne ou deixá-lo seco, se é possível cortar a carne, pois isso em ambos os processos tem aumentado sua dureza e consistência...
Como estudar os organismos têm uma consistência semelhante ao pedaço de carne fresca do exemplo é necessário aumentar a dureza e consistência de forma artificial, existem diferentes métodos, o método mais utilizado é a inclusão em parafina. Não é um processo simples e envolve várias etapas. 3 Técnicas histológicas: como fazer para obter histológica cortes, inclusão e o Tribunal de Justiça

1 FIXAÇÃO
Material biológico, a partir do momento da morte, passa por um processo de degradação, conhecido como podridão, devido tanto a causas endógenas (autólise) ou exógenos (ataques bacterianos). É claro que essa degradação torna progressivamente mais difícil (mais uma vez) a degradação mais o estudo de estruturas biológicas para o meucroscopio.
Para evitar esta degradação é necessário para estabilizar as estruturas e torná-los disponíveis para tal degradação, tão usados produtos químicos conhecidos como "clips". A natureza química dos clipes é variada, mas eles tendem a ser moléculas com vários grupos ativos que se ligam a moléculas diferentes da célula, criando uma rede interligada de molecular que ataques bacterianos e enzimáticos são mal sucedidos, mantendo assim a estrutura da célula.
Muitas vezes são utilizadas técnicas de microscopia óptica convencional baseado em formaldeído, fixadores em soluções tampão ou misturadas com outras espécies químicas (como acontece com o ácido pícrico em fixador de Bouin) qualquer.
Como gerenciar o post à amostra depende das circunstâncias da coleção.
-Bem, humanas (e animais) espécimes obtidos post-mortem (necropsia) ou por extração direta (biópsias), o método de fixação é simple: submerge a amostra em um recipiente com a substância de ligação. O fixador deve espalhar tecidos para executar sua ação. Às vezes, dependendo da natureza dos tecidos Esta penetração não é completae há um gradiente de fixação, fixa ainda melhor a fixação pior, as áreas centrais e zonas periféricas.
-No caso de animais de experimentação e para evitar o efeito do gradiente de fixação é um método comumente usado de perfusão. A idéia é simples: ele está injetando líquido fixador no sistema cardiovascular, para que este circule por todo o corpo e, assim, a fixação é homogênea em todos os tecidos. Normalmente está injetando líquido fixador para a altura do ventrículo do coração ou da artéria aorta e na altura do átrio sangue deve ser drenado para evitar sobrepressurização do sistema causando ruptura dos capilares.
Em um caso ou outro deixou um pedaço longo para garantir que o fluido de bloqueio concluiu seu efeito. Neste ponto a peça é inserida em uma amostra de cassete (buracos de uma pequena caixa de plástico). Este exemplo permite fácil mudança de amostras de alguns recipientes outros mantendo a integridade da peça. Fixação tempo peça deve limpa com banhos de água freqüente, primeiro água da torneira e em seguida destilada água para remover todos os vestígios de fijador poderia reagir com as substâncias químicas que devem ser usadas mais tarde.

INCLUSÃO DE 2
Inclusão é o processo pelo qual aumenta a dureza e a consistência da peça para permitir a sua corte. Isto é conseguido incluindo a peça em uma substância que dureza e consistência adequada. A parafina geralmente é usada neste processo. O desafio é substituir a água que está dentro e fora de células por parafina.
A parafina é uma substância que é líquido e solidificado abaixo desta temperatura sobre o Garcia, isso facilita a disseminação de parafina por tecidos quando líquido, no entanto, um outro problema que deve ser superado é o fato de que a parafina é altamente hidrofóbica, ou seja, não pode ser misturado com água ou substâncias em meios aquosos. Portanto, o próximo passo que deve sofrer as amostras é a remoção da água da amostra: desidratação.
A desidratação das amostras de uma substituição gradual da água é conseguida pelo etanol. Para obtê-lo passa por sucessivos banhos de gradação crescente partes de etanol, começando com 500 ou 700 etanol e concluindo combanhos diferentes de etanol absoluto (1000), passando por banhos de etanol 960.
A peça, já desidratada, ainda não pode ser passada para parafina desde que o etanol é miscível com a parafina. Um agente intermediário, ou seja, uma substância que é miscível com etanol, como a parafina é usada. O intermediário comumente usado é xileno, em que a peça sofre vários banhos para substituir completamente o álcool.
Com a peça em xilol, geralmente através de um banho de uma mistura de Xileno-Pereira 50% para favorecer a penetração de parafina. Após este banho ocorrem várias casas de banho em parafina pura, até que a parafina tem ido completamente em toda a peça. Todas estas casas de banho que incluem parafina são Garcia fogão para manter a parafina líquida. Em alguns laboratórios em todo este processo são automatizados usando um dispositivo (robô), alterando uma amostras de fluido para outro usando um programa predefinido.
Uma vez passado o tempo que a parafina penetra os tecidos, a pergunta é executar um bloco com tudo isto, que pode ser usado para obter cortes no micrótomo. 4 Técnicas histológicas: realização de blocos de parafina
A maneira mais fácil é usarum molde em que a parafina é derramada e que introduz a amostra processada e deixe esfriar para solidificar o conjunto. Uma estação é usada para esta finalidade em muitos laboratórios. Estas estações têm um tanque de parafina líquida (Garcia), de que pode ser dispensada a parafina no molde através de uma torneira; Há também uma câmera onde você armazenar diferentes moldes Garcia e um prato quente (Garcia) e outra fria (40 ° c). Dinâmica é simple, se encaixa o molde sob a torneira de parafina e está cheio de parafina líquida, a peça é colocada e orientada, finalmente pela base da cassete de inclusão. Conjunto acima o prato frio move-se com cuidado para conseguir uma rápida solidificação não formando cristais e solidificou uma vez removido o molde preparando um bloco de corte, como mostra o diagrama interativo.

3. CORTE (PLACA)
Micrótomo (grego, "pequeno" micros e volumes "seção/parte") é o instrumento adequado para cortes finos de material biológico de parafina.
Em essência, o micrótomo consiste em uma lâmina fixa e um braço móvel, que prevêe sobe e baixa exibe, de modo que recai sobre os cortes de get. Este tipo de micrótomos são chamados "Minot ou micrótomo rotativo". 5 Técnico histológico como é e como o micrótomo
O braço é capaz de fazer avançar as distâncias de amostra muito pequena (geralmente de 5 a 10 m) com um sistema mecânico de precisão, com base em um parafuso de passo linha muito fina.
No final do braço, há ungir o clip em que se encaixam a cassete de bases que formam o bloco. Braço move-se com o bloco em posição elevada, uma vez que você tem a quantidade desejada de Micron bloco de baixo do braço avançado atinge a borda da lâmina e o Tribunal de Justiça instala-se sobre ele, quando o braço alcança sua posição mais baixa, sobe e começa um novo ciclo de corte. O processo é controlado por uma alça circular, que ser operado, concluiu um ciclo de corte de cada volta.
Lâminas de MICRÓSCOPIO são muito afiadas conseguir cortes homogêneos e finos, a maioria dos laboratórios costumam usam lâminas intercambiáveis, que são substituídas quando eles perdem a nitidez.
Efeito o bloco sobre a borda da lâmina, por atrito, aumenta a temperatura suficiente para que oa nova edge ligeiramente cortado a sua capa e irá juntar-se com o corte anterior, assim fazendo vários cortes, estes formam um cordão na superfície da lâmina.

4. MONTAGEM DE CORTES
Para Ver os cortes ao microscópio necessária montado em uma folha fina de vidro (slide). 6 HistológicasManejo técnica de cortes histológicos
Para fazer isso, primeiro separe cortes um por um, ou em pequenas tiras que podem ser montadas no slide.
Os cortes sair enrugados do micrótomo, devido ao atrito entre a lâmina e o bloco, então torna-se necessário esticar os cortes para sua observação correta.
Para conseguir isso os cortes feitos para flutuar em um banho de água morna (cerca de 35-360 C). Devido ao calor, a parafina expande-se esticando o corte até que esteja completamente lisa. Quando os cortes são esticados, eles simplesmente pescam com os slides. Anteriormente no slide superfície estende uma fina camada de uma substância magnética que protege o corte para deslizar e evita o corte sai nos processos subsequentes. As etapas - lisina como substância aderente é usado em muitos laboratórios.
Quando temos os cortes acima slide deixados para secar (geralmente em um forno a)35-360 C.

5 COLORAÇÃO
Fino corte de material biológico é basicamente transparente, para que ele não consegue distinguir qualquer coisa a observar ao microscópio.
É por isso que ele é necessário manchar amostras para distinguir as células e tecidos.
Protocolos de coloração são executados por banhos seqüenciais de vários corantes e reagentes. Existem diferentes maneiras de fazer isso:
-Pode ser slides para um arrefecimento rack colocado em uma bandeja e com uma pipeta vão colocar os diferentes corantes e reagentes.
Vários slides colocados em cestas especiais de vidro, que vão desde um balde para outro, contendo cada balde pode mancha ou reagente de tintura relevante.
-O processo de coloração em racks pode ser através de um automatizado usando um robô que muda automaticamente a criva por uma predefinição vezes.
Seja qual for o método utilizado, a (seqüência de etapas) para uso de protocolo de coloração vai depender o que você deseja exibir os tecidos transformados.
Protocolos (técnicas) de coloração, vários livros foram escritos desde que eles são muito numerosos e variados. No finalNeste tópico que vamos fazer um resumo das técnicas mais comuns utilizadas em histologia.
Entre todas as técnicas de coloração é uma que se destaca acima dos outros, uma vez que é de longe o mais utilizado em todo o mundo, é a técnica de hematoxilina-eosina. 7 colunar simples tecido epitelial
Hematoxilina é uma mistura de corante (há variações) que é básica na natureza, para que ele se liga a substâncias ácidas. Nas células, a área mais ácida é o núcleo, pois é cheio de ácidos nucleicos (DNA), pelo qual o núcleo virar com uma hematoxilina de cor azul-violaceo.
Eosina, uma cor de corante é rosa-rojo, que é dissolvido em etanol e tem um ácido, então ele liga para as Basic (pH elevado) estruturas de tecidos. Estruturas com pH mais elevado do tecido são proteínas, porque tem as pontes de enxofre e nitrogênio. É que em amostras processadas com essa técnica, manchada-de-rosa, de preferência, o citoplasma e a matriz extracelular, ambos ricos em estruturas da proteína.
Todo processo de coloração pode ser dividido em três fases:
-A primeira fase comsistema a solventes e a hidratação dos cortes. Para desparafinar corta com xilol, que dissolve o banho de parafina e hidratação é uma seqüência de etapas inverta a desidratação.
-Com a amostra em meio aquoso é com o escolhido protocolo de coloração. O protocolo é geralmente consistem de uma sequência de banhos com corantes, produtos de limpeza e reagentes, o que é típico de cada técnica.
-A terceira fase visa a montagem permanente de espécimes para observação ao microscópio. Meio de montagem é colocado em cima deles para caber e proteger os cortes: uma substância líquida que cristaliza com ar (polimeriza) e uma folha muito fina de vidro (lamínula), eles formam um todo estável e durável. O meio de montagem é geralmente uma substância hidrofóbica, pelo que ela corta antes de ser montado tem que ser desidratado, seguindo um protocolo semelhante à usada durante a inclusão.
A preparação montada é deixada para secar por algumas horas e mantida no escuro para evitar que a luz degrada as cores.

AMOSTRAS SOB O MICROSCÓPIO
Com tudo explicado até agora, o estudante pode ser uma idéia clara do processo que éexecuta até os preparativos para estudar sob um microscópio.
Agora, é desejável que o aluno deve ter em conta alguns conceitos necessários para o estudo de amostras sob um microscópio. 8 Níveis e profundidade de Corte histológico
-Em primeiro lugar, o aluno tem que entender que as estruturas biológicas são geralmente estruturas complexas e tridimensionais que, sob o microscópio, você vê apenas flats (em duas dimensões). Assim, por exemplo, os túbulos renais são tubos cilíndricos, com o que se poderia esperar que, ao microscópio, esses túbulos eram como anéis (seção de um cilindro). O problema é que esses tubos não estão em linha retos e tem muitos vira (como outros tubos do corpo, por exemplo, o intestino), então em um mesmo corte e um túbulo mesmo muitas seções podem ser visualizadas como mostrado no diagrama. Ou seja, o aluno deve seguir a mesma estrutura de corte em orientação diferente pode exibir diferentes seções.
-Abundam neste tópico da tridimensionalidade, outro fato que deve ser levado em conta é a profundidade do corte. Esse problema é perfeitamente ilustrado no diagrama onde você toma como exemplo um ovo (que em essência é u)(célula de ND). Isso ainda cortar o ovo no mesmo plano pode exibir diferentes seções dependendo da profundidade a que o corte foi feito.
É importante que os alunos compreendam os dois conceitos para interpretar corretamente as estruturas observadas ao microscópio.
Por outro lado, o aluno deve ter uma observação dinâmica correta das amostras para a utilização máxima de cada sessão de estudo.
Nosso Conselho é:
-Comece por observar a preparação com a olho nu, colocando-o sobre uma superfície branca. Em muitos casos o aluno pode localizar os mais notáveis elementos anatômicos do corpo a estudar.
-Em segundo lugar, colocação no convés e observá-lo com o menor da lente (4x) e navegar por toda a preparação, localizando as áreas de interesse e singular de elementos.
-Finalmente e com áreas de interesse localizado, ir progressivamente usando os objectivos de maior crescimento em cada uma dessas áreas, para distinguir os elementos estruturais, tecidos e característica de tipos de célula da amostra estudada.

Até agora descrevemos procedimentos, instrumentos e processos mais usuais de coloraçãono estudo da anatomia convencional, vamos agora dar uma breve revisão para outros tipos de ferramentas, processos de inclusão e protocolos de coloração, que são também frequentemente utilizados em histologia.

OUTROS TIPOS DE MICROSCÓPIO
Além do curso de campo do microscópio óptico, que é o mais utilizado em qualquer laboratório de histologia, existem outros tipos de microscópios resultados (imagens), que o aluno será provavelmente usada durante seu aprendizado, embora seja improvável que você usá-lo diretamente uma vez que eles tendem a ser escasso, caro e complexo de usar. 9 Técnicas histológicas: exemplos de resultados de diferentes tipos de microscópios

TRANSMISSÃO DE ELECTRON MICROSCOPE (TEM)
O microscópio eletrônico de transmissão é um instrumento de estudo que usa a mesma estrutura conceitual do que um microscópio óptico convencional, mas ele usa um feixe de elétrons, em vez de um feixe de fótons (feixe de luz). 10 Técnicas histológicas: como é e como MET (microscopia eletrônica de transmissão)
O comprimento de onda do elétron é menor que 1nm, ou seja, cerca de 500 vezes menores que o comprimento de onda da luz (aproximadamente 400-600 nm), assim com uma transmissão microscópio eletrônico pode obter cerca de 500.000 de aumentos.
Usar elétrons em um microscópio envolve uma série de problemas:

-Em primeiro lugar, deve levar em conta que os elétrons são eletricamente carregada assim se esses elétrons, em sua carreira, encontraram-se com átomos, por eletrostática, nuvens de elétrons de átomos encaminhados para os elétrons no feixe, tornando impossível obter uma imagem coerente. Por que microscópios dentro devem ser o mais completo vácuo.
-Em segundo lugar, devemos ter em mente que para fazer um microscópio se comportam como tal, é necessário ter algumas lentes que alterar o caminho do feixe. O problema é que as lentes ópticas não servem para este propósito, então você tem que dar as lentes do microscópio de elétron, caso contrário. Como alterar um feixe de elétrons é através do uso de um campo magnético, é por isso uma lentes do microscópio são bobinas eletromagnéticas que geram estes campos magnéticos.
-O terceiro é a espessura do corte. Se usarmos um corte usado para a microscopia óptica (de 5 a 10 m de espessura), a quantidade de material biológico dentro esta espessura é tal que a imagem seria incompreensível. É por isso quea espessura dos cortes para este tipo de microscopia deve ser muito mais fina, que variam entre 40 e 50 nm. (0,04-0,05 m). Nem também pode ser usado vidro slides (para muito bem o que quer que) desde que o feixe de elétrons não envolvidos, é porque muitas vezes é usado como desliza uma grelha de metal fina (cobre), o Tribunal baseia-se em filamentos da grade sendo suspenso nos espaços entre os filamentos.
-Então temos de resolver o problema do contraste (Mancha). Amostras biológicas apresentam um contraste contra os elétrons muito semelhantes entre se e em geral é muito baixos, então torna-se necessário aumentá-lo. Em microscopia eletrônica são inúteis corantes usados em microscopia óptica (oferta apenas contraste com elétrons), portanto, é necessário o uso de outras substâncias de contrastadoras. Acetato de urânio é usado basicamente, esta molécula quimicamente vincula a matéria biológica e com a grande quantidade de elétrons do átomo de urânio, que lá onde há um acúmulo de elétrons do material biológico (com acetato de urânio quimicamente ligado) não atravessam a amostra a ser desviado pela nuvem de elétrons hoje fazEntão lá onde há uma baixa concentração de material biológico, os elétrons vão passar através da amostra mais fácil. Isso faz com que a imagem final é composta pela presença ou ausência de elétrons. IMAGENS DE MICROSCÓPIOS SÃO MONOCROMÁTICO (PRETO E BRANCO).
-O último problema que tem que ser resolvido é a obtenção da imagem. O olho humano não é capaz de Ver os elétrons, por isso, é necessário elaborar um sistema para obter uma imagem visível. O sistema utilizado é uma placa de fósforo. Fósforo tem a propriedade que será alcançado por um elétron libera um fóton, assim que você começa o retrato. Além disso, os elétrons também podem impressionar uma chapa fotográfica convencional, e mesmo com a ajuda de um sensor digital de elétrons, pode ser obtida uma imagem em um monitor de computador.

Processamento de amostras para MET
Processamento das amostras para MET em essência é semelhante ao usado em microscopia óptica, convencional, tendo em conta a característica peculiar do MET.
-Em primeiro lugar deve ter em mente que ver aumentos de mais é necessário que a conservação de estruturas biologiCAs é muito mais fiel e exato para a microscopia óptica. É por isso que muitas vezes são utilizados fixadores muito mais poderosos, como o Glutardialdehido e até mesmo costumam fazem um postfijacion com tetróxido de ósmio (OSO4), que tem quatro grupos ativos que formam muito mais redes densas de material biológico na amostra.
-Então tem que ter em conta, como já dissemos que o Tribunal tem que ser muito mais fino (40-50 nm = 0,04 - 0,05 m), são referidos como cortes ultrafinas. Então é óbvio que precisamos de um micrótomo de maior precisão (ultramicrotome). Em partes de adição deve ser em um material mais duro que a parafina para obter tais cortes grossos. Os materiais mais comumente usados são poli-componente de resinas sintéticas, que exigem um tratamento semelhante da parafina, com a diferença que estas resinas são líquidas em temperatura ambiente e que Polimeriza a determinadas temperaturas.
-O ultramicrotome funciona essencialmente como o micrótomo de Minot Rotary com a particularidade de que sua mecânica é muito mais precisa, permitindo movimentos tão pequenos que necessitam de obter cortes ultrafinas. Outra peculiaridade deste tipo de microtomia reside na natureza das lâminas, que têm de ser de um material extremamente duro cortar blocos de resina. Estas lâminas são, geralmente, de um vidro especialmente Tratado que permite a obtenção de uma série de cortes de 30 ou 40, após o qual a lâmina tem que ser substituído desde que ele perdeu a vantagem. Em certas ocasiões, você pode usar lâminas com borda do diamante, o que significa que o estudante são incomuns, dado seu alto preço. Anexa a lâmina com um pedaço de plástico no final do que constitui uma cavidade que está cheio de água onde o flutuador cortes, uma vez feitas, e onde eles são capturados com redes de amostra.
-Racks com anexado corta os reagentes necessários para executar o contraste (acetato de urânio e outros), depois à esquerda para secar e já pode ser observado para o MET. Ao contrário do tratamento com parafina, essa técnica não remove o meio de montagem (resina).

O ultramicrotome com cortes mais grossos também pode ser obtida (1-2 mm) ao seu estúdio em microscopia óptica convencional (de campo claro), estes cortes são conhecidos como "semi-fino".

MICROSCOPIA ELETRÔNICA DEVARRER (MEB / DIGITALIZAÇÃO)
O microscópio eletrônico (varredura), também usa um feixe de elétrons e usa bobinas electromagnéticas, como lentes, mas aí terminam as semelhanças. 11 Técnicas histológicas. Como é e como o SEM (microscópio eletrônico de varredura / digitalização)
Este microscópio é usado para o estudo de superfícies, não para o estudo dos componentes do íntimos de tecidos e células.
Então o feixe de elétrons não passa através da amostra, mas sim um bobinas defletora fez uma varredura da superfície da amostra.

Processamento das amostras para o MEB
A amostra para este tipo de microscopia, não é um corte muito bem, mas é uma amostra completa ou quase completa, assim com esta técnica pode ser estudados pequenos organismos inteiros, como por exemplo, insetos.
A preparação da amostra também é diferente do que é feito para o M.E.T. Para o M.E.B. lá são cortes, mas a peça, (uma parte de tecido, um inseto, etc...) É desidratado e coberto com uma fina camada (monomolecular) de um metal condutor (geralmente ouro).

Bombardeando a amostra com um feixe de electrões (elétrons primários) a camada de metal reage emitindo um elétron para cada elétron que recebe. Estes electrones de elenco (que são chamados de elétrons de secundário) tem a característica que são emitidas em um ângulo que depende do ângulo de incidência do elétron primário em relação à superfície da amostra.
Os elétrons secundários são coletados por um coletor de elétrons dividida em uma matriz de células e, em seguida, um sistema de computador é responsável por gerar uma imagem em um monitor, com base: um ponto de luz para cada elétron detectado.
Como os elétrons secundários podem cadastradas na matriz em números diferentes em cada célula, devido ao ângulo em que eles são gerados, a imagem mostra claro e escuro, refletindo a superfície tridimensional da amostra, dando informações adicionais de tecidos para aqueles que podem ser obtidos com um microscópio óptico convencional ou até mesmo um MET.

OUTROS MICROSCÓPIOS ÓPTICOS
Nesta seção, daremos uma breve revisão dos outros microscópios ópticos (que usa a luz), usado em histológica, embora em determinadas circunstâncias.

Microscópio de contraste de fase:
Este tipo de microscópio baseia-se na óptica de um feixe de propriedade de mudança de fase de luz para atravessar um objeto composto de diferentes materiaisEle diz de refração. Usando esta técnica, você pode ver os materiais unstained e é especialmente útil para o estudo da matéria viva (célula de culturas, etc...)

Dispositivo de campo escuro:
Este dispositivo não cair perpendicularmente à amostra, mas tangencialmente, assim que é refratada pela amostra em direção à meta, em áreas em que não há nenhum material é todo preto, daí o nome de "campo escuro".

Microscópio de fluorescência:
Este microscópio usa luz ultravioleta em vez de luz branca. Essa luz faz com que a fluorescência em certas substâncias (cartões de fluoro-beisebol) que são usadas como corantes. Este tipo de microscópio, o fundo é preto e cromado-fluoro-rotulado estruturas emitem sua própria luz (que é o que é).

Microscópio confocal:
O microscópio confocal é um microscópio óptico de características especiais e de surgimento recente.
Esta beneficia de microscópio é exclusivos, assim, por exemplo, você pode ver amostras de grossas, do qual o microscópio obtém imagens não de toda a espessura da amostra, mas seções de pequena espessura (em estilo a tomografia axial computadorizada) como luego, por programas de computador, pode reconstruir uma estrutura tridimensional que é exibido na tela do computador.
Ele também permite o estudo de amostras vivas (cultura celular) ao longo do tempo, o que o torna ideal para a compreensão de certos processos biológicos.
É um microscópio de início recente, não pela complexidade óptica da sua construção, que já estava em operação na década de 1950, mas a complexidade de hardware e software de computador necessário.
O microscópio confocal tem vários laser de transmissores, que são as fontes de luz utilizadas.
Cada um desses lasers é diferente comprimento de onda e o incidente na amostra sempre animado para foto-cromos (que são "corantes") que respondem, cada um em um determinado comprimento de onda, permitindo várias marcas com a mesma amostra, revelando estruturas diferentes em diferentes cores.

OUTRAS TÉCNICAS DE COLORAÇÃO
Na seção "Mancha", comentou a técnica de hematoxilina-eosina, que é, sem dúvida, o mais utilizado na técnica de histologia, mas obviamente que existem muitas mais técnicas de coloração. Nesta seçãoVamos fazer a revisão de outras técnicas, entre muitos, que são também utilizados em histologia, embora com muito menos freqüentemente do que o h e sempre exibir características específicas dos tipos de tecido ou célula. 12 Técnicas histológicas: exemplos de técnicas de coloração

TÉCNICAS DE QUÍMICA GERAL (CONVENCIONAL)
Estas técnicas destinam-se a mostrar as características gerais, especialmente a topografia de tecidos e órgãos. A base dessas técnicas é uma reação química (ácido-base, redox) entre as cores e os elementos estruturais dos tecidos.
Estas técnicas são muitas e variadas, que podem ser classificados de acordo com o número de cores, em: monocromicas, bicromicas e tricromicas.
Nesta seção incluímos a técnica da (bicromica) h & e explicado acima.

Técnicas de Monocromicas
Estas técnicas usam apenas a tintura de matizes como todos os tecidos e diferenciação é conseguida graças a diferente natureza dos tecidos, assim, um epitélio formado por uma camada contínua de células é tingido mais intensamente do que o tecido conjuntivo, onde vivem as fibras (coradas menos) comalgumas células.
Estas técnicas incluem:
-Anilina azul
-Azul de toluidina
-Hematoxilina Hedienhain
-Vermelho neutro
Estas técnicas são muitas vezes realizadas em cortes de entre 5 e 10 m parafina.

Técnicas de Tricromicas
Como seu nome indica, estas técnicas usam uma combinação de três cores. Uma característica destas técnicas é que tendem a manchar o tecido conectivo de forma diferencial, desde que um dos corantes tendem a ter afinidade para fibras (colágeno) da matriz extracelular desse tecido.
Essas técnicas utilizam frequentemente, bem como a hematoxilina-eosina, para o estudo topográfico de corpos, com o valor acrescentado da facilidade de reconhecimento do tecido conjuntivo.
Técnicas de Tricromicas mais comumente usados são:
-Tricromo de Masson
-Mallory tricrômio
Estas técnicas são muitas vezes realizadas em cortes de entre 5 e 10 m parafina.

TÉCNICAS ESPECÍFICAS DE QUÍMICAS
Esta seção inclui as técnicas que são baseadas em uma reação química convencional entre uma tintura e um elemento específico de tipos de células, fibras extracelulares, etc...
Abaixo estão algumas dessas técnicas que são comumente usados em laboratórios de histologia.

Técnica de PAS-H
Esta técnica baseia-se o uso combinado do ácido periódico junto com o reagente de Schiff.
Esta combinação manchado seletivamente mucopolissacarídeos. Estas peças estão nas placas basais dos epitélios, secreções mucosas ou o glicocálix de microvilli, assim que esses itens são seletivamente manchados cor de rosa-rojo.
Geralmente combinado com hematoxilina, que manchas cor de violeta-azul de núcleos e permite melhor localizar itens corados com PAS.
Esta técnica é geralmente realizada em cortes de entre 5 e 10 m parafina.

Alcian blue - técnica PAS
Essa técnica combina a reação do PAS com o azul de alcian. O azul de alcian manchas especificamente mucopolissacarídeos de ácido em contraste do PAS, que as manchas mucopolissacarídeos de caráter neutro.
Por que essa técnica é preferencialmente usada no estudo das secreções mucosas do trato digestivo mucosa secreções neutras (rosa-rojo) para diferenciar de secreções mucous ácidas (azuis).
Esta técnica é geralmente realizada em cortes de entre 5 e 10 m parafina.

Técnica de orceína Picro-índigo-carmim
Essa técnica é especialmente recomendada para o estudo do sistema cardiovascular, pois ele tingido duras fibras elásticas (p. ex. de artérias elásticas ou o endocárdio do aparelho), enquanto os matizes das fibras de colágeno pálidos azul-verde (por exemplo os do acidental arteriais ou venosos ou do epicárdio do coração).
Essas técnica é geralmente realizada em cortes de entre 5 e 10 m parafina.

Técnica de Gordon-doces
É técnica baseia-se na utilização de sais de prata, que, em combinação com outros reagentes utilizados nesta técnica seletivamente, manchado de preto as fibras reticulares do tecido conjuntivo.
Esta técnica é geralmente realizada em cortes de entre 5 e 10 m parafina.

Técnica de Sudan IV
Sudan IV é um corante solúvel em gordura, por isso é muito adequado para tingimento de elementos gordurosos, como os adipócitos.
Para realizar esta técnica, durante o processamento de tecidos não deve ser usado de qualquer solvente orgúnica, porque que iria dissolver elementos gordurosos que destinam-se para tingir; Isso torna impossível incluir amostras em parafina, para que amostras geralmente são cortadas por congelamento em uma espessura de cerca de 30 m, feita com o criostato.

HISTOCHEMICAL E TÉCNICAS DE IMUNO-HISTOQUÍMICA
Estes tipos de coloração não baseiam-se em reações químicas básicas mas reações mais específicas, como a atividade enzimática ou imunológica.
Os tipos de reações que são aproveitados como essas técnicas são variadas.
Assim podemos encontrar reações de alta especificidade entre moléculas, como a técnica da lectina de tomate.

Técnica de tomate lectina
Lectinas são proteínas que se ligam seletivamente determinados açúcares, lectina de tomate é combinada com a N-Acetilglicosamina, que, no fígado, por exemplo, encontradas nas paredes endoteliais dos vasos (sinusóides) e macrófagos (células de Kupffer).
A lectina de tomate combinada com uma molécula de marcador (como biotina) é usada em histologia. Biotina, em seguida, pode ser colocada de manifesto em um processo de desenvolvimento. O processo é simples: Coloque olectina marcado durante o corte, espera-se um tempo suficiente para que a lectina é um açúcar e, em seguida, revela que você vê sob um microscópio.
Essa técnica pode ser, tanto em cortes de cerca de 30 m, feita por congelamento em criostato, ambos os cortes de 5 a 10 m em parafina.

As técnicas Histochemical (Histoenzimaticas) com base nas reações enzimáticas de moléculas (enzimas) presentes no tecido da amostra.
Mecânica geral baseia-se na colocação de um substrato adaptado à enzima para estudar sobre o corte histológico, para que a reação enzimática e posterior para detectar qualquer um dos produtos do que a reação.
Um exemplo deste tipo de técnicas é as técnicas de NDPasa.

A técnica de NDPasa
A NDPasa é uma enzima que é, entre outras, as células da microglia de sistema nervoso Central e a parede dos vasos sanguíneos.
Para revelar as estruturas que contêm esta enzima em cortes histológicos, o que você faz é colocar um produto que esta enzima degrada, neste caso, Inositol-fosfato, o Tribunal de Justiça. Pára tempo reação assim enziMatica, cujo resultado é a formação de precipitado no lugar onde ocorre a reação. Marcação através de um tratamento do precipitado com sulfeto e sais de prata, é posteriormente amplificada que lhe fornece um marrom muito escuro. Um contraste com o azul de toluidina é feito para localizar as células não marcadas.
Células marcadas (microglia) aparecem sob o microscópio de cor marrom escura, bem como os vasos sanguíneos, enquanto outros tipos de células são tingidos em azuis.
Esta técnica é geralmente realizada em cortes de em torno de 30 m, feita por congelamento em criostato.

Técnicas imuno-histoquímicas baseiam-se sobre o fenômeno natural do reconhecimento específico de uma molécula (antígeno) por outro (anticorpo), isso é conhecido como reação imune. Se usarmos um anticorpo marcado o resultado é que a marca vai estar lá onde o antígeno (dado a especificidade da reação antígeno-anticorpo).
Agora o bioindustry oferece lotes de anticorpos marcados contra uma grande variedade de antígenos.

Técnica da GFAP
A GFAP é uma proteína que éencontrada exclusivamente nos astrócitos e células da mesma linhagem.
Esta técnicas imuno-histoquímicas o que é feito é colocar sobre o corte de uma solução do rótulo de anticorpo para o anticorpo localizar e anexar seletivamente a GFAP. Mais tarde é revelado, para obter que só aparecem coloridas células contendo essas proteínas, é este o caso, os astrócitos.
Esta técnica é geralmente realizada em cortes de em torno de 30 m, feita por congelamento em criostato.

TÉCNICAS ESPECÍFICAS PARA O ESTUDO DO SISTEMA NERVOSO
Neurônios (juntamente com as células gliais), são células do sistema nervoso e como o aluno é conhecido, tem um organismo ou célula soma do partir, dendritos e axônio. Esta peculiaridade faz com que o tecido nervoso para apresentar uma estrutura especial, em que se misturam em dendritos e axônios (parênquima do nervo / neurópilo) e no qual estão localizadas as somas neuronais.
Esta característica peculiar, juntamente com o interesse que o estudo do sistema nervoso tem levado ao desenvolvimento de muitos desse tecido, técnicas de coloração. Nesta seção, vamos discutir alguns dos técnico musado como.

Técnica de Nissl
Esta técnica é comumente usada no estudo do tecido nervoso, em vez de hematoxilina-eosina. Que é uma técnica de levantamento topográfica que mostra a distribuição das somas neuronais o neurópilo.
O corante utilizado nesta técnica é a toluidina azul, que se aplica após a pré-transformação no dicromato de potássio. Violeta Cresilo usado como corante em algumas variantes.
Somas neuronais são manchadas azul escuro, enquanto o parênquima aparece quase branco. Células gliais (seus corpos celulares) também são coradas em azul escuro e podem-se distinguir os diferentes tipos de sua forma e localização. Cortes o suficientemente bem (até 5-7 m de espessura), a grandes aumentos (400-1.000 x) é vistos no citoplasma do corpo neuronal (soma) alguns acúmulos que são conhecidos como corpos de Nissl, que correspondem a pilhas de cisternas do retículo endoplasmático rugoso.
Esta técnica é geralmente realizada em cortes de entre 5 e 10 m em parafina.

Técnica de Klüver - branco
A técnica de Klüver-Barrera usa apara o estuEle deu topográfico sistema nervoso de ambas as somas neurais de fibras (axônios) pacotes de mielinicos.
Nesta técnica, além do azul de toluidina (para coloração das somas neuronais), usado o Luxol fast blue, que seletivamente as manchas a mielina em torno de alguns axônios (mielinicos axônios).
Esta técnica é geralmente realizada em cortes de entre 5 e 10 m em parafina.

Técnica de prata reduzida de Cajal
Essa técnica é usada principalmente para o estudo de axônios amielinicos de pacotes (não mielinizadas).
Esta técnica baseia-se em uma impregnação de prata de tecido nervoso e subsequente redução química. Este processo tingidas de Neurofilamento marrom escuro e neurotubulos, então ele destaca axônios amielinicos (no mielinicos de nitrato de prata não pode passar através da bainha de mielina), dendritos e célula do corpo, não o kernel (que não mancha).
Esta mancha é feita em bloco, manchas ou seja, todo o cérebro (ou uma parte) e uma vez coradas, tecido inclui parafina, cortar (com uma espessura de 10 m) e é montado no slide.

TécnicaComplexo de Golgi
A técnica de Golgi é talvez o mais paradigmático das técnicas de coloração no estudo do sistema nervoso.
Esta técnica destina-se a ser capaz de estudar neurônios completos, incluindo a soma, dendritos e axônio. Como o aluno é conhecido, os neurônios são células com extensões (dendritos e axônio) florestadas lidando com um grande volume de tecido, um poliedro que inclui um "tipo" neurônio pode ter m de 100-200 x m-100-200 x 100-1000 m bordas.
Isso envolve várias circunstâncias a ter em conta:
-Em primeiro lugar é óbvio que a completos neurônios em um corte de 5, 10 ou 30 m de espessura não podem ser vistos e precisarão ser cortes mais grossos (m de 100-150).
-Em segundo lugar, deve mancha apenas uma pequena proporção de neurônios, pois se eles tiñeran tudo, a coloração de todos os seus elementos, alguns neurônios dos outros não poderiam ser distinguidos.
Ambas as circunstâncias são dadas na técnica de Golgi, onde o tecido nervoso com uma solução de nitrato de prata, está impregnado no bloco após um endurecimento com dicromato de potássio. Esse processo consegue impregnar um muito pequenoProporção ENA do total de neurônios (aproximadamente 0,03%). Hoje, ainda está em discussão o mecanismo pelo qual alguns neurônios são corados e outros não.
A técnica de Golgi é feito em bloco, ou seja, com o cérebro completo (ou parte dele). Os cortes têm que ser grossa (100-150 m), a peça não é incluída em parafina ou cortada com um micrótomo rotativo. A peça impregnada com a técnica de Golgi pode incluir celóidina (colódio purificado) ou encaixar no devido lugar gelatina ou mesmo parafina. Para o corte são usados frequentemente outros menos sofisticados dispositivos, como um vibratomo, um micrótomo deslizante ou até mesmo um simple Barbeiro em uma lâmina de micrótomo de mão.
Como resultado desta técnica, um microscópio tão observado neurônios completos que podem seguir o curso sinuoso de suas dendrites, usando o movimento do baralho e o controle de botão de foco. Como o nitrato de prata não pode cruzar a bainha de mielina, será somente os axônios não mielinizadas.
Você também pode exibir a célula glial e vasos sanguíneos.

OUTROS INSTRUMENTOS, PROCEDIMENTOS E PROTOCOLOS
Como ele tem objetivoou nos parágrafos anteriores, na histologia, como explicado, usando outros instrumentos, protocolos e procedimentos, dependendo do resultado que pretende obter.
Assim, por exemplo, uma variedade de aparelhos é usada para cortar: 13 Técnicas histológicas: tipos de micrótomo

OUTROS MICRÓTOMOS
Além de micrótomo rotativo ou Minot para corte de parafina, como já explicado, na prática de rotina para o desenvolvimento de técnicas específicas de histologia.

Ultramicrotome
Em essência, este instrumento continua o modelo mecânico do micrótomo rotativo, mas com uma precisão muito maior, para obter muito mais finos cortes (40-50 nm) para ser usado em microscopia eletrônica de transmissão.
Outro tipo de lâminas mais duro, constituído especialmente tratados, mesmo com a borda do diamante vidro são usado este micrótomo.

Criostato
O criostato é, em essência, um micrótomo rotativo dentro de um armário de alimentos refrigerados. Obviamente, usada para cortar amostras em baixas temperaturas, para técnicas que exigem a manutenção da atividade biológica em amostras, por exemplo, a técnica histoenzimaticas e a imuno-histoquímica.
Amostras congeladasum, após tratamento com um crioprotetoras e corte, montando os cortes no slide, que geralmente é feito o tratamento imuno-histoquímica e histoquímica.

Vibratomo
Vibratomo, como seu nome sugere, baseia-se em um braço de ressonância que não é muito finos cortes (entre 25 e 500 m). Normalmente usado para histoenzimaticas técnicas e imuno-histoquímica, pois não é necessário incluir partes de parafina, embora atualmente o criostato é usado mais para estas técnicas.
Ocasionalmente, utilizou-se o vibratomo para fazer cortes com a técnica de Golgi.

Micrótomo de mão
Ele é o mais simples dos micrótomos e simplesmente é um worm que gera a amostra sobre uma superfície plana, sobre que desliza a uma afiada lâmina para cortes.
SEU posto de corte varia de 20 a 150 m e é amplamente utilizado em histologia vegetal. Histologia animal é usada para cortes mais grossos na técnica de Golgi.

ARTEFATOS DE COLORAÇÃO
Como o aluno viu-se a técnica é complexa e envolve muitos passos, então pode acontecer que em algum destes passos sãoprodutos de distorção ou pequeno bug, que, em seguida, encontrado durante o estudo da amostra sob um microscópio, é o que é conhecido como artefatos de coloração. 14 Técnicas histológicas. Artefatos de coloração
Em si mesmos os artefatos não têm nenhum valor histológica, mas você pode obter para o encontrado foi-lhes durante o estudo de preparações o aluno a confundi-los com elementos do tecido que se torna conveniente para o aluno ciente de sua existência.
A maioria dos aparelhos produzem alterações microscópicas que são completamente invisíveis a olho nu, por isso é muito difícil que a histologista pode evitá-los.
Nas páginas seguintes o aluno vai encontrar exemplos diferentes dos artefatos mais comuns que podem ser encontrados no estudo de preparações histológicas.

EM TIRAS
A aparência com bandas que mostram algumas preparações geralmente é causada por um ângulo de incidência incorreto da lâmina.
Outros, por vezes, ocorre uma faixa para tentar cortar muito fino um tecido que não tem a dureza e/ou consistência suficiente.

BOLHAS
Algumas preparações são pequenas bolhas de ar prendido no meio de montagem.
Esse aparelho geralmente é dado quando o meio demontagem é muito densa e solidifica rapidamente.

CORES SPOT E DE INCLUSÕES
Às vezes, durante o processo de preparação de amostras, preferencialmente durante a montagem final, "deslizar" sobre pontos de corte de poeira, pêlos pequenos e outros elementos do ambiente constam na preparação para utilizar o meio de montagem.
Estas inclusões também podem ser precipitados devido à cor do corante de pequenos cristais.

NICKS
Os nicks são produzidos por pequenas imperfeições da borda da lâmina durante o corte em micrótomo.
Estes nicks causam arraste e destruição de uma faixa reta de tecido cuja largura corresponde à largura das imperfeição a extremidade da lâmina e ocupando todo o tecido na direção do Tribunal.

DOBRAS
As dobras são ocorrem frequentemente durante o cortador no slide Assembly.
Às vezes é uma simples ondulação do tecido, às vezes é uma grande dobra que dobra sobre si mesmo.


Estamos convencidos de que ler este tópico vai ajudar o aluno a compreender o processamento histológico que é necessário para obter os cortes que vão estudar o microscópio e este RedunARA em uma melhor compreensão das células do tecido e das estruturas observadas durante o estudo.

Classe / Técnicas histológicas

Artigo 4:Técnicas histológicas: realização de blocos de parafina

4/14 Valentin Martín
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